上海科器儀器設備有限公司
主營:多樣品組織研磨機、組織研磨機、高速組織勻漿機、手持式組織勻漿機、混勻儀、清洗機、液氮罐、干燥箱
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提取動物關節軟骨組織總RNA
實驗目的
研磨破碎軟骨組織(大鼠膝關節軟骨),提取其總RNA。
實驗原理
充分磨碎軟骨樣品(大鼠膝關節軟骨),再用相關試劑提取其總RNA。
實驗材料和器具
樣品:大鼠膝關節軟骨
儀器:多樣品組織研磨儀(上海凈信,Tissuelyser-24)
耗材:研磨罐(上海凈信,***ml),研磨珠(上海凈信,***mm,***顆)
試劑:液氮若干
實驗步驟
1.研磨軟骨組織
1.1 取適量大鼠膝關節軟骨組織,剪切成約***立方厘米小塊;
1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中***分鐘或放入***度冰箱冷凍30分鐘;
1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中,蓋好蓋子;
1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管,放入已經在***度冰箱預冷好的適配器中,加入變性液,β-巰基乙醇;
1.5 將適配器放入凈信研磨儀中,在***hz條件下,研磨***min,可得到勻漿狀的軟骨組織;
2.總RNA提取
2.1 冰水浴下,加酸性水飽和酚,搖勻,加醋酸鈉,氯仿、異戊醇混合液,冰水浴上***min;
2.2 ***℃下,離心,取上清液,加氯仿、異戊醇混合液,離心取上清,加異丙醇,***℃下沉淀,離心,得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀,加無RNA酶水,溶解得膠狀溶液;
2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀,即得關節軟骨組織總RNA溶液。
實驗結果
采用本實驗方法提取的動物關節軟骨組織總RNA的收率高,并且純度高、質量、完整性好,可以滿足分子生物學研究應用。
總
RNA甲醛變性膠電泳結果
Ⅱ型膠原PCR擴增產物電泳結果
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